2 fabricants de hplc en 2024

Qu'est-ce que la HPLC ?

La HPLC, High Performance Liquid Chromatography, est une méthode permettant de séparer et de détecter des composés individuels dans un échantillon en utilisant l'interaction entre une colonne et un échantillon. Elle est utilisée dans diverses industries, principalement dans les secteurs pharmaceutique, biochimique, alimentaire et environnemental. Elle est en effet simple à utiliser et permet de détecter des éléments à l'état de traces.

Comme la surface du pic de la HPLC est proportionnelle à la concentration de l'échantillon, la concentration des composants dans l'échantillon peut également être quantifiée. Le comportement de séparation des échantillons dans la HPLC dépend de la colonne et de la phase mobile, il est donc nécessaire de concevoir des conditions d'analyse appropriées.

Utilisations de la HPLC

La chromatographie liquide à haute performance (CLHP, ou HPLC en anglais) est une méthode d'analyse qui utilise l'interaction entre une colonne et un échantillon pour séparer les différents composants d'un échantillon. Elle est très simple à utiliser et peut être analysée par injection directe de la solution de l'échantillon ou en plaçant la solution de l'échantillon dans un échantillonneur automatique pour un traitement par lots.

La HPLC est utilisée dans de nombreux secteurs d'activité. Par exemple, elle est utilisée dans le secteur pharmaceutique pour analyser des traces d'impuretés et d'ingrédients actifs, dans les secteurs de l'alimentation, des boissons et de l'environnement pour analyser les ingrédients nutritionnels et fonctionnels, les additifs et les résidus de pesticides, et en biochimie pour analyser les protéines et les substances liées aux acides nucléiques.

Principe de la HPLC

La HPLC et la chromatographie en phase gazeuse (CPG) sont des types de chromatographie. La chromatographie est une méthode qui permet de séparer les composés d'un analyte en les faisant passer à travers une colonne ou un autre support et par la différence de force d'adsorption des différents composants.

Le type et l'ampleur de l'interaction entre les composants de l'échantillon et la colonne dépendent du type de colonne. Par exemple, dans les colonnes ODS, les chaînes alkyles (groupes octadécyles) sont modifiées sur la colonne et l'échantillon est adsorbé par des interactions hydrophobes.

Dans les colonnes de gel de silice, en revanche, les groupes silanol à la surface adsorbent les composés polaires. D'autres types de colonnes sont également disponibles, notamment des colonnes modifiées avec des groupes phényles, des groupes cyanos et des groupes aminés.

Calcul de la concentration à l'aide de la surface des pics de la HPLC

La surface des pics de la HPLC est proportionnelle à la concentration de l'échantillon. Cependant, lorsqu'un détecteur UV est utilisé, la surface du pic change en fonction du coefficient d'absorption, même si la concentration de l'échantillon est la même. Par conséquent, lors de l'analyse des concentrations par HPLC, il est nécessaire de préparer des étalons pour comparer les surfaces.

L'une des méthodes d'analyse des concentrations est la méthode de l'étalon externe. Dans cette méthode, plusieurs échantillons standards de concentrations connues sont préparés et analysés par HPLC pour déterminer les surfaces des pics. La concentration de chaque échantillon étant connue, une équation permettant de déterminer la concentration à partir de la valeur de la surface peut être obtenue en traçant la valeur de la surface et la concentration.

La deuxième méthode est la méthode de l'étalon interne. Dans cette méthode, un autre composé chimiquement ou physiquement stable est ajouté comme étalon interne à un échantillon standard de concentration connue. Après l'ajout, une analyse HPLC est effectuée pour déterminer le rapport entre la surface du pic de l'échantillon standard et celle de l'étalon interne. Une courbe d'étalonnage peut être obtenue en utilisant le rapport de la quantité d'étalon interne ajoutée comme abscisse et le rapport des surfaces des pics comme ordonnée.

Détecteurs HPLC et limites de détection

Divers instruments sont disponibles comme détecteurs HPLC. Il s'agit par exemple de détecteurs de spectroscopie ultraviolette-visible (UV-Vis), de détecteurs de fluorescence et de détecteurs d'indice de réfraction différentiel (RID). Les limites de détection de ces détecteurs varient considérablement en fonction de l'échantillon. Par exemple, la limite de détection des détecteurs UV-Vis est d'environ 10 picogrammes (pg) et de 0,1 pg pour les détecteurs de fluorescence.

Le plus sensible est le spectromètre de masse (MS), dont la sensibilité de détection est estimée à 0,01 pg. Toutefois, la limite de détection dépend du type et de la concentration des composés dans l'échantillon et du degré de séparation. Dans certains cas, une dérivatisation, c'est-à-dire l'ajout d'un groupe fonctionnel à l'échantillon qui émet une fluorescence, est nécessaire. L'optimisation de l'analyse HPLC, y compris la préparation de l'échantillon, est nécessaire pour une détection à haute sensibilité.